كيمياء

طرق الهندسة الوراثية

طرق الهندسة الوراثية



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

تسلسل PCR

تفاعل البلمرة المتسلسل هو عملية دورية يتم فيها تكرار ثلاث خطوات حتى يتوقف التفاعل.

  1. ذوبان الحمض النووي مزدوج الشريطة (تمسخ) القالب الخاص بـ PCR هو في معظم الحالات نموذج مزدوج الشريطة الحمض النووي1)، ولكن يمكن أن يكون أيضًا ملف RNA2) يمكن استخدامها. في درجات الحرارة المرتفعة ، يذوب الشريط المزدوج للحمض النووي إلى قسمين منفصلين ومتكاملين3) خيوط الحمض النووي. في الخطوة الأولى من تفاعل البوليميراز المتسلسل ، والذي يحدث عادةً عند 92 درجة مئوية تقريبًا لمدة 30 ثانية ، يتم فصل خيوط الحمض النووي المزدوجة عن بعضها البعض.
  2. تجليد قليل النيوكليوتيدات القصيرة بالحمض النووي أحادي السلسلة (التلدين التمهيدي). التمهيدي عبارة عن جزء قصير من الحمض النووي أحادي الجديلة. هذا التمهيدي يجد "نظيره" على الحمض النووي أحادي الخيط بالمثل ، أي تسلسل مكمل لهذا التمهيدي ، ويرتبط به. تعتمد درجة الحرارة التي يتم تنفيذ هذه الخطوة عندها على درجة حرارة انصهار البادئات المستخدمة ويتم حسابها بدقة لكل تجربة. إذا كانت درجة الحرارة مرتفعة جدًا ، فلن يعود التمهيدي قادرًا على الارتباط ، وإذا كان منخفضًا جدًا ، فإن التمهيدي يرتبط أيضًا بمواقع أخرى على الحمض النووي. الظروف المعتادة ، على سبيل المثال ، 50-60 درجة مئوية لمدة 30 ثانية.
  3. تمديد التمهيدي بواسطة إنزيم بوليميراز DNA (التمديد التمهيدي) إن بوليميراز الحمض النووي هو إنزيم يحول الحمض النووي أحادي الجديلة مرة أخرى إلى خيط مزدوج. للقيام بذلك ، فإنه يتطلب طولًا قصيرًا من الخيط المزدوج ، كما هو الحال في الخطوة السابقة بربط التمهيدي الذي نشأ فيه الحمض النووي. يتعرف بوليميراز الحمض النووي على الطرف الحر 3 'من التمهيدي ويضيف الآن النوكليوتيدات بالنيوكليوتيدات حتى يكتمل حبلا الحمض النووي المزدوج مرة أخرى. تتم هذه الخطوة عند درجة الحرارة المثلى للبوليميراز ، أي في حالة البوليميراز المستقر للحرارة عند درجة حرارة 72 درجة مئوية تقريبًا لمدة 60 ثانية.

نتيجة هذه الخطوات الثلاث من تفاعل البوليميراز المتسلسل هي جزيئين من الحمض النووي ، وكلاهما تمت إضافتهما مرة أخرى لتشكيل حبلا مزدوجًا.عند اكتمال هذه الخطوة الأخيرة ، تبدأ الدورة مرة أخرى - يتم الآن صهر كلا الخيطين المزدوجين في أربعة خيوط مفردة ثم يضاف مرة أخرى إلى أربعة خيوط مزدوجة ، وهكذا.


فيديو: Hereditary Breast Cancer (أغسطس 2022).